一、产品信息

名 称：SP-CHO细胞

货 号：THJ-SP-01

规 格：106/mL

类 型：贴壁生长

形 态：在培养液中贴壁，上皮样细胞            

 

二、细胞功能

1. 作为新冠病毒的治疗和预防产品的研发的体外研究模型(cell models)，尤其是药物筛选模型。

2. 将SP-CHO细胞株和ACE2-CHO细胞株同时用于药物筛选，消除biased结果，显著增加药物筛选的成功率。

3. 用于研究新冠病毒药物与靶点的专一性结合试验（specific binding test），同时采用FACS和ELISA方法，以使结果相互验证，保证结论可靠。我们的大量研究表明，各种形式和大小的重组SP所形成的单体结构（RBS, S1等），与新冠病毒表面的SP三聚体结构，有着极为显著的差别；能够阻断‘体外分泌型的重组SP与ACE2结合’的药物，实际上很可能无法阻断新冠病毒SP三聚体与ACE2的真正结合。

4. 用于研究药物的靶点确认（target validation），也就是研究药物是与SP三聚体的哪一个结构域或区域结合。

5. 用于研究药物的靶点亲和力(affinity)和亲和力( avidity)。

6. 用于建立竞争结合测试方法（competition binding assay）,获得竞争曲线（competition curve），测定IC50。

7. 用于建立体外功能测定方法（in vitro functional assay），获得‘剂量-应答曲线(dose-response curve), 测定IC50。

8. 用于测定药物的体外药效(efficacy test),获得in vitro EC50数据。

9. 用于检测药物的旁观效应（bystander effect）。

 

三、Toggle In技术优势

1、 高表达位点的定点整合：

在CHO细胞基因组中预先找到高表达“热点”，采用Cre-LoxP同源重组方法定点整合，因染色体结构开放而始终恒定表达。各细胞克隆之间性质完全相同（isogenic）。

2、 按特定比例（Stoichiometry）同时表达多个基因：

按Toggle In方法，外源基因克隆在pTOG3和pTOG4载体中，每次都将外源基因整合到指定高表达热点。外源基因的表达比例完全可控，适用于多亚基蛋白复合物（例如各种受体复合物，酶亚单位等）的同时等比例表达。

3、 仅仅需要2个抗生素筛选基因，循环使用，可实现连续无上限打靶。

4、 近乎100%打靶效率，2周筛选后，细胞池即可用。

 

四、细胞功能鉴定

SP-CHO细胞胰酶消化单悬后，与哺乳动物细胞重组表达的 ACE2-Fc蛋白孵育，继而用PE-Cy5标记的羊抗人IgG二抗续染。FACS图谱见下。

 

 

五、产品运输和保存

冻存细胞装于2mL的冻存管中，置于装满干冰的保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快复苏细胞进行培养。如无法立刻进行复苏操作，将冻存细胞存放于液氮罐或 -80℃冰箱中。

 

六、产品使用

1、 细胞生长环境：37℃，5% CO2，细胞培养液：95%DMEM+5%FBS，DMEM：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺和抗生素。

2、 传代培养：

l 观察细胞的生长状态，细胞铺展，细胞大小均匀，生长状态良好，细胞长至80%满进行传代；

l 吸除旧培养液，用DPBS洗涤细胞；

l 加入适量胰酶，于倒置显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，加入适量含5%血清的新鲜培养基终止胰酶作用；

l 无需离心去除胰酶，可直接吸取适量新鲜培养基将细胞轻轻吹起，移液管上下吹吸数次以打散细胞团块，混匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中。置于37℃二氧化碳培养箱静置培养。

3、 细胞冻存：

l 配制含8-10%DMSO+ 92-90%FBS胎牛血清的冻存液；

l 取对数生长期的细胞，胰酶消化单层生长的细胞，将细胞移至15ml离心管中，离心1200 rpm×5min；

l 去除胰酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为3~5×106/mL；

l 将细胞分装入冻存管中，每管1 mL； 

l 在冻存管上标明细胞的名称，传代代数及冻存时间； 

l 将细胞置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱中过夜；

l 次日取出冻存管，移入液氮容器内。

4、 细胞复苏：

l 从液氮容器中取出冻存管，浸入37℃水浴锅中，并不时摇动令其尽快融化；

l 从37℃水浴锅中取出冻存管，用移液管吸出细胞悬液， 无需离心洗涤，可直接加入含5 % FBS培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养皿，37℃二氧化碳培养箱静置培养。

5、 本产品仅用于科研。